Elisa for Siberian Sturgeon (Acipenser Baeri Brandt) Vittellogenin

A specific and simple enzyme-linked immunoassay for the sturgeon (Acipenser baeri) vitellogenin (VG) is described. This assay is based on the competition between soluble VG and VG adsorbed on microtiter plates, for the rabbit anti-VG antibody binding sites. The adsorbed VG-antibody complexes are then revealed using the peroxidase-anti-peroxidase technique and read at 492 nm. The intensity of the reaction is proportional to the amount of the antibody linked to the adsorbed VG. The sensitivity was about 3 ng/well with an intra-assay variation of 10 % (n=30) and an inter-assay variation of 11 % (n=40) near 50 % of binding. Five main steps can be defined : Antigene-coating : VG was coated using a 500 ng/ml solution of VG in 0.05 M carbonate buffer pH 9.6 ; specific antibody incubation : diluted 1/20000, with serial dilutions of samples or of the reference preparation ; second antibody incubation : swine IgG anti-rabbit IgG diluted 1/2000 ; Peroxidase-anti-Peroxidase complex incubation dilutes 1/5000 ; revelation of the adsorbed complexes by o-=phenylene-diamine and hydrogen peroxide in citrate-phosphate buffer 0.1 M pH5. The data were expressed using two models : Bi/Bo = F (log(doses)) or F (log(dilution)) ; logit (Bo-Bi/Bi-N) = F (log(dose) or F (log(dilution)). Transformation allowed us to fit a least squares linear regression. Comparison of regression curves was based on covariance analysis after having tested the homogeneity of their variance by the Bartlet test. Parallel displacement was verified with the standard preparation serial dilutions of females plasmas and also with most of the 14 males plasmas tested. These data provide an argument for the presence of VG in the plasma of reared male sturgeon. / Nous décrivons ici un dosage ELISA (enzyme-linked immunoassay) simple et spécifique pour la vitellogénine (VG) de l'esturgeon sibérien Acipenser Baeri. Ce dosage est basé sur la compétition entre Vg soluble et la Vg absorbée par les plaques de microtitration pour les sites de fixation de l'anticorps anti-Vg développé chez le lapin. Les complexes Vg-anticorps, absorbés sur la plaque, sont alors révélés par la technique peroxydase-anti-peroxydase et lus à 492 nm. L'intensité de la réaction est proportionnelle à la quantité d'anticorps lié à la Vg absorbée. La sensibilité du test est d'environ 3 ng/puits avec une variation intra-dosage de 10 % (n=30) et une variation inter-dosage de 11 % (n=40) aux environs de 50 % de liaison. On distingue 5 principales étapes : greffage de l'antigène : il est réalisé par une solution de Vg à 500 ng/ml dans du tampon carbonate 0.05 M pH 9.6 ; incubation avec l'anticorps spécifique : (dilution 1/20000) avec des dilutions seriées des échantillons ou du standard (Vg) ; incubation avec le second anticorps : IgG de proc anti-IgG de lapin dilué au 1/2000 ; complexes peroxydase-anti-peroxydase : dilué au 1/5000 ; révélation des complexes absorbés par une solution d'ophénylènediamine et d'eau oxygénée dans un tampon citratephosphate 0.1 M pH 5. Les données sont traitées selon deux modèles : Bi/Bo = F (log(dilution)) ; Logit (Bo-Bi/Bi-N) = F (log(dose)) ou F (log(dilution)). Cette transformation permet de réaliser une régression linéaire de type Y=AX + B par la méthode des moindres carrés. La comparaison des droites de régression est basée sur l'analyse de covariance après avoir, au préalable, testé l'homogénéité des variances par le test de Bartlet. nous observons le parallélisme entre la Vg et les dilutions de plasma de VG chez les mâles élevés en pisciculture.