Production of polyclonal antibodies towards the immunodetection of insecticide phosalone
Hapten synthesis for the production of specific insecticide phosalone polyclonal antibodies was carried out starting from an intermediate of the phosalone synthesis, 6-chloro-2-benzoxazolone 1. Two haptens containing different spacers have been prepared : N-5-carboxypentyl-6-chloro-2-benzoxazolone 7 and N-(2-oxo-3-aza-5-carboxypentyl)-6-chloro-2-benzoxazolone 12. Each of these two haptens conjugated to bovine serum albumine (BSA) was used to immunize four rabbits. Immunoassays of phosalone were performed with ELISA using solidphase bound hapten thyroglobulin conjugate and horseradish peroxidase labelled goat antirabbit IgG. The more sensitive response was observed when the antiserum obtained from the rabbit immunized with the hapten-BSA conjugate containig the N-2-oxo-3-aza-5-carboxypentyl spacer was in competition with the same hapten coupled to thyroglobulin. An identical response was obtained under the same conditions when using benzoxazolone instead of phosalone as competitor, showing a good recognition of the specific aromatic part of the organophosphate insecticide phosalone. Reduction of coating conjugate concentration (from 2 to 0.05 µg/well) and also the use of heterologous coating protein instead of homologous did improve the sensitivity, resulting in a concentration of phosalone required to inhibit binding by 50 % of 2 mg/l and a detection limit of 0.02 mg/l. / La synthèse d'haptène pour la production d'anticorps polyclonaux spécifiques de la phosalone a été étudiée à partir d'un intermédiaire de la synthèse de la phosalone, la 6-chloro-2-benzoxazolone 1. Deux haptènes contenant des fonctions d'ouverture de chaîne ont été préparés : N-5-carboxypentyl-6-chloro-2-benzoxazolone 7 et N-(2-oxo-3-aza-5-carboxypentyl)-6-chloro-2-benzoxazolone 12. Chacun de ces deux haptènes conjugué à l'albumine sérum bovine (ASB) a été utilisé pour immuniser quatre lapins. Les immunoessais de la phosalone qui ont été réalisés à partir des anticorps obtenus ont donné des réponses plus sensibles avec l'antisérum de lapin immunisé avec le conjugué de l'haptène ASB contenant l'espaceur N-2-oxo-3-aza-5-carboxypentyl en compétition avec le même haptène couplé à la thyroglouline. Une réponse identique a été obtenue avec la benzoxazolone à la place de la phosalone comme compétiteur, montrant une bonne reconnaissance de la partie arômatique spécifique de l'insecticide organophosphate phosalone. La réduction de la teneur en coating de conjugué (de 2 à 0.05 µg/puits) et l'usage d'un coating en protéine hétérologue au lieu d'homologue ont amélioré la sensibilité, induisant un seuil de phosalone de 2 mg/l pour inhiber de 50 % la fixation et une limite de détection de 0.02 mg/l.
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