Purification de particules virales associees a l'enroulement de la vigne et mise au point d'un protocole ELISA permettant leur detection

Des particules virales de type clostérovirus ont été purifiées de vignes atteintes d’enroulement. Ces particules sont extraites par une précipitation fractionnée au polyéthylèneglycol (PEG 6000) permettant de réduire la proportion de contaminants végétaux. Elles sont finalement purifiées par centrifugation dans un gradient de saccharose. Les nucléoprotéines virales sont injectées à un lapin afin de produire les immunoglobulines nécessaires à leur détection en ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Parallèlement, les mêmes particules virales ont servi à l’immunisation d’une poule et à l’extraction d’immunoglobulines à partir des oeufs recueillis. L’utilisation simultanée d’immunoglobulines de poule (IgGC) et de gammaglobulines de lapin (IgGR) préalablement absorbées par des extraits foliaires de vigne saine, permet la détection de vignes atteintes d’enroulement au moyen d’un protocole ELISA indirect. La comparaison d’extraits végétaux provenant de différents organes de vigne malade montre que les feuilles constituent l’organe de choix pour la détection sérologique des particules de type clostérovirus. Afin de vérifier la corrélation entre la présence de particules virales filamenteuses et l’observation des symptômes d’enroulement, nous avons éprouvé 61 vignes de différents cultivars par le procédé ELISA indirect. Des réactifs immunochimiques spécifiques de particules de type clostérovirus isolées de vignes atteintes d’enroulement nous ont été fournies par le Dr GUGERLI (GLRV1) et le Dr GONSALVES (NY-1). Leur utilisation en ELISA a permis une analyse complémentaire des 61 vignes mentionnées ci-dessus. Parmi les 50 vignes montrant des symptômes d’enroulement, 44 réagissent dans au moins un des 3 systèmes ELISA employés. Aucune vigne saine ne réagit en ELISA. Deux virus différents liés à l’enroulement ont été distingués sur la base des réactions sérologiques obtenues. Des travaux d’immunomicroscopie (ISEM) complètent les études sérologiques en ELISA.